02 PROCEDIMIENTO PARA EL AISLAMIENTO DE ADN A PARTIR DE SANGRE COAGULADA DE AVES

Resumen

Con la finalidad de aislar ADN genómico de forma económica y segura, a partir de muestras de sangre coagulada de aves, para realizar estudios de genética molecular, se optimizó el siguiente protocolo: se tomaron 250 µL de coagulo de sangre, se agregaron 400 µL de buffer de lisis celular (10mmol/L Tris HCl, pH 8,0; 10mmol/L KCl; 10mmol/L MgCl2; 2mmol/L EDTA, pH 8,0; 0,4 mol/L NaCl y 10g/L SDS) y se dejó incubar hasta el día siguiente a temperatura ambiente. Se añadieron 350 µL de cloroformo y se agitó por 10 segundos, después se añadieron 350 µL de acetato de potasio, se agitó por 10 segundos y se centrifugó por 10 minutos (14.000g – 16.000g). El sobrenadante se transfirió a tubos nuevos, se agregaron 700 µL de isopropanol, se centrifugó por 5 minutos (14.000 g – 16.000 g) y se descartó el sobrenadante. Se realizaron dos lavados con 700 µL de etanol 70% c/u, se centrifugó por 5 minutos y se descartó el líquido. El sedimento se secó 10 min a 450C y 8 min a 650C para después rehidratar con 20 – 25 µL de TE-1X. La concentración y pureza del ADN aislado se determinó por espectrofotometría a 260 nm, mostrando un promedio de 2.288,12 ng/µL y 2,04 respectivamente. La idoneidad del ADN se evaluó mediante amplificación por PCR de los marcadores genéticos moleculares MCW0241 (274 pb y 278 pb) y LEI0122 (310 pb y 306 pb). El procedimiento descrito permitió obtener ADN de buena calidad y en grandes cantidades de forma simple, confiable y económica.